检测的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对黄曲霉毒素抗体的捕获抗体。加入标准品或样品溶液、酶标记黄曲霉毒素（酶连接物）和黄曲霉毒素抗体。游离的黄曲霉毒素和酶连接物竞争黄曲霉毒素抗体结合位点（竞争性酶联免疫分析）。同时黄曲霉毒素抗体也与微孔板上固定的捕获抗体结合。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。在孔中加入底物/发色剂，结合的酶连接物将发色剂转化为蓝色。加入反应终止液后颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm 处测量，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素浓度成反比。