简介

PowerSoil®-htp 96 Well Soil Isolation Kit可用于最多0.25 g土壤中基因组DNA的提取。该试剂盒给研究者们带来了新的提取环境样品中基因组DNA的高通量方法。与UltraClean®-htp 96 Well Soil Isolation Kit不同的是，PowerSoil®-htp 96 Well Soil Isolation Kit含有抑制因子去除技术（Inhibitor Remover Technology®, IRT），能更高效地去除抑制PCR的腐殖质，即使是极为复杂的土壤样品，也能高效去除PCR抑制因子，从而使获得的DNA能成功进行PCR扩增等下游应用。

已提取的样品包括堆肥、底泥和粪便等多种类型。提取出来的DNA可直接用作模板进行PCR扩增，以分析样品中的微生物多样性，经过PCR扩增验证可以提取的微生物类型有：细菌（革兰氏阳性、革兰氏阴性和芽孢菌类）、放线菌和真菌等。

操作预览

将环境样品加入到96孔bead beating plate中快速彻底均质。结合机械和化学方法使细胞裂解。通过专门的沉淀过程去除腐植酸。释放的基因组总DNA吸附到96孔spin column plate硅胶膜上，然后将DNA从膜上洗脱下来。获得的DNA可直接用于PCR分析或其他下游应用。

注意：2块96孔板的操作时间估计将近8 h，操作说明中会提到暂停点。操作中大部分时间会用于称取和添加土壤样品。

加样量

该试剂盒的设计加样量是0.25g土壤样品。不同类型土样建议加样量见下表，湿土见“湿土”部分：

*要一次提取5 g以上土壤DNA，推荐使用PowerMax® Soil DNA Isolation Kit（货号：12988-10）

湿土

若土样含水量较高，10000g离心30s，去除游离水分再称重加样。严格控制0.25g的起始加样量。

难裂解细胞

若样品中的微生物不易被机械和化学方法裂解，可在加入C1溶液后，加一个70℃水浴10 min的步骤，再使用96孔板振荡器进行机械裂解。

样品预处理方法准备（传统冷冻法）

将样品加入到Bead Plate后置于-70℃或-20℃中直至样品完全冷冻。迅速将Bead Plate放到65℃水浴中。再重复上述过程一次后加入C1溶液。

可选：第二次反复冻融后，对于某些微生物，可计入蛋白酶K与C1Solution一同作用，以提高裂解效率。

离心速度达不到4500 g

用说明书中时间和转速的乘积来确定总离心力。根据离心机的速度来计算离心时间（可四舍五入）以保证足够离心力。例如：4500 g ×10 min = 45000。若离心机速度为2500 g, 则离心45000÷2500 = 15 min。

DNA浓缩

最终DNA体积为100μl。要浓缩DNA，可加入5μl 5M NaCl并上下颠倒3-5次混匀。然后加入200μl 冷乙醇并上下颠倒3-5次混匀。在-20℃孵育10min或过夜孵育。13000g离心15 min。弃去所有上清液。用70%冷乙醇洗涤DNA沉淀。13000 g离心10 min 再次沉淀样品。弃去乙醇并用真空离心蒸发器、干燥器或冷干机去除残余乙醇。用无菌水或10mM Tris重悬沉淀。

注意：样品单独转移至离心管后才能进行此浓缩。

DNA保存

洗脱到C6溶液（10mM Tris）的DNA应保存在-20℃以防降解。用TE缓冲液洗脱DNA可防止DNA降解，但其中的EDTA可能会抑制下游PCR或测序等。DNA也可用无菌DNA-Free PCR级水（货号：17000-10）洗脱。用无菌水洗脱的DNA应保存在-70℃。

KingFisher Duo、KingFisher Flex和epMotion自动化核酸提取仪定制96孔板磁珠法高通量提取：

PowerMag™ Soil DNA Isolation Kit (Optimized for KingFisher®)

PowerMag™ Soil DNA Isolation Kit (Optimized for epMotion®)