产品型号:21000
产品规格:50/100次
发货:3天内
PowerFood™ Microbial DNA Isolation Kit可提取根据FDA指南（细菌学分析法，第8版，A/1998修订版）培养的食物微生物高质量基因组DNA。此试剂盒联合使用了我们的抑制因子去除技术®（IRT）和改进的缓冲液，提高DNA得率的同时，完全去除抑制因子，最终DNA可直接用于下游PCR、qPCR等试验。
成功使用PowerFood™ Microbial DNA Isolation Kit提取并实时PCR检测得到的食物病原如下表。
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病原 |
强化营养食品 |
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Clostridium difficile 艰难梭菌 |
绞碎牛肉，即食沙拉 |
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Clostridium perfringens 产气荚膜梭菌 |
绞碎牛肉，胡萝卜汁 |
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Enterococcus faecalis 粪肠球菌 |
即食沙拉 |
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Escherichia coli 埃希氏大肠杆菌 |
草莓、橙汁 |
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Lactobacillus acidophilus 嗜酸乳杆菌 |
奶酪、酸乳 |
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Lactobacillus spp. 乳酸杆菌 |
奶酪、酸乳 |
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Listeria monocytogenes 李斯特杆菌 |
布里干酪芝士 |
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Salmonella enterica 沙门氏菌 |
草莓、橙汁、布里干酪芝士 |
提取未经培养的食物DNA
可以从液体或固体食物中直接提取DNA。微生物DNA得率虽小，但也能通过PCR扩增检测得到。无论匀浆固体食物还是液体，微生物都可能与部分食物成分同时离心下来。加入PF1前使用枪头尽可能移除上层脂肪和食物匀浆。
l 固体食物：0.25g食物、 0.75ml PBS（自备）加入到一个2ml Collection Tube（试剂盒提供）。13000g离心1~3min。使用枪头尽可能移除食物残渣和上层液体，不要触动底部沉淀球。加入450μl PF1开始提取。
l 液体食物：取1-1.8ml液体食物13000g离心1~3min。使用枪头尽可能移除食物残渣、脂肪、液体，不要触动底部沉淀球。加入450μl PF1开始提取。
下列食物样品微生物DNA可直接提取并能成功PCR扩增：奶油（12%，25%脂肪），布里干酪（37%脂肪），橙汁、草莓、生菜、芦笋和牛奶黑巧克力。
微生物沉淀球中出现未磨碎食物残渣
食物成分会有可能连同操作步骤2的微生物细胞一同离心沉淀。根据食物类型不同，沉淀小球可大可小。按照说明书要求重悬整个沉淀小球即可。
可选裂解方法（每次提取建议只采用其中一个裂解方法）
l 为了增加得率：加热可辅助裂解部分类型微生物细胞，从而提高得率。步骤4完成后，65℃水浴10min，接着步骤5继续。
l 为了减少DNA断裂：步骤4后，65℃水浴10min，期间每2-3min稍微涡旋振几秒。忽略步骤5、6，直接进入步骤7。可尽可能减少对大片段DNA的损害。此方法会降低DNA断裂的同时，对于部分类型微生物可提高DNA得率。
l 细胞难裂解：步骤4完成后，70℃水浴孵育10min。接着步骤5继续。